凝固酶试验凝固酶试验是鉴定葡萄球菌致病性的重要试验。致病性葡萄球菌可产生两种凝固酶，一种是与细胞壁结合的凝聚因子，称结合凝固酶，它直接作用于血浆中纤维蛋白原，使发生沉淀，包围于细菌外面而凝聚成块，玻片法阳性结果是由此凝聚因子所致;另一种凝固酶是分泌至菌体外，称为游离凝固酶，它能使凝血酶原变成凝血酶类产物，使纤维蛋白原变为纤维蛋白，从而使血浆凝固。试管法可同时测定结合型和游离型凝固酶。试验方法：(1)玻片法：取兔血浆和盐水各一滴，分别置于洁净的玻片上，挑取被检菌分别与血浆和盐水混合。(2)试管法：取试管2支，各加0.5ml人或兔血浆，挑取被检菌和阳性对照菌分别加入血浆中并混匀，于37℃水浴3～4h。结果判读：(1)玻片法：5-10s内血浆中有明显的颗粒出现而盐水中无自凝现象为阳性。(2)试管法：如有凝块或整管凝集出现为阳性。2h后无上述现象出现，则放置过夜后再观察。注意事项①玻片法为筛选试验，阳性、阴性均需进行试管法测定。②血浆必须新鲜。③应使用肝素而非枸橼酸盐作抗凝剂抗凝的血浆。④本试验也可用市购的胶乳凝集试验试剂盒测定。临床应用及意义作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，也是葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。异常结果：(1)侵袭性疾病主要引起化脓性炎症。 (2)毒性疾病由金葡菌产生的有关外毒素引起。凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌是人类重要致病菌，医院感染。感染常以急性、化脓性为特征，如果未经治疗，感染可扩散至周围组织或经菌血症转移至其他器官。常见的感染有疖、痈、外科切口、创伤等局部化脓性感染和骨髓炎、化脓性关节炎、肺炎、心内膜炎、脑膜炎等全身性感染。金黄色葡萄球菌的致病性主要与各种侵袭性酶类（如血浆凝固酶、透明质酸酶、磷脂酶、触酶、耐热核酸酶）和多种毒素（溶血毒素、杀白细胞素等）有关。某些菌株产生的肠毒素可引起食物中毒，表现为急性胃肠炎。噬菌体Ⅱ组金黄色葡萄球菌产生的剥脱毒素（或称表皮溶解素）可引起人类烫伤样皮肤综合征，多见于新生儿、幼儿和免疫功能低下的成人。患者皮肤呈弥漫行红癍和水疱形成，继以表皮上层大量脱落。由噬菌体Ⅱ型金黄色葡萄球菌产生的毒性休克综合征毒素－1（toxicchocksyndrometoxin1，TSST－1），引起机体发热并增加对内毒素的敏感性，该毒素属超抗原家族，刺激T细胞诱发TNF和LI－1，可致机体多个器官系统的功能紊乱或引起毒性休克综合征（TSS）。凝固酶阴性葡萄球菌是人体皮肤粘膜正常菌群之一，是医院感染的主要病原菌，其中表皮葡萄球菌引起人工瓣膜性心内膜炎、静脉导管感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人工关节感染等；腐生葡萄球菌则是女性尿路感染的重要病原菌，其他凝固酶阴性葡萄球菌也已成为重要的条件致病菌和免疫受损患者的感染菌。感染的发生常和细菌产生夹膜多糖或糖萼有关，它增强细菌与外来物质（生物性瓣膜、导管等）表面的粘附或在其表面形成一层生物膜而保护细菌对抗杀菌物质作用。葡萄球菌医院感染和临床治疗的棘手问题。DNA酶试验原理：某些细菌产生DNA酶，可使长链DNA水解成寡核苷酸链。因为长链DNA可被酸沉淀，寡核苷酸链则溶于酸，所以当在菌落平板上加入酸后，会在菌落周围出现透明环。试验方法：0.2％DNA琼脂平板，将被检菌点种于上述平板上，于35℃培养l8～24h，然后用lmol/L盐酸覆盖平板，观察结果。结果判读：在菌落周围出现透明环为阳性，无透明环为阴性。临床应用及意义：在革兰阳性球菌中只有金黄色葡萄球菌产生DNA酶，在肠杆菌科中沙雷菌和变形杆菌产生此酶，故本试验可用于细菌的鉴别。硝酸盐还原试验根据某些细菌能还原硝酸盐为亚硝酸盐，亚硝酸盐与醋酸作用，生成亚硝酸，亚硝酸与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮基苯磺酸，后者与α-萘胺结合生成N-α萘胺偶苯磺酸这个原理进行的试验方法。试剂：甲液：氨基苯磺酸0.8g5mol/L醋酸ml乙液：α-萘胺0.5g5mol/L醋酸ml试验方法：将被检查部分的取出的培养液中待检菌接种于硝酸盐培养基(内含小倒管)中，35℃孵育1-4d。将甲、乙等量混合液(用时混合)0.1ml加于试管内，立即或10min内观察结果。做此试验时，应以一支未接种细菌的培养基做对照试验，只有对照管阴性时，才能判定。结果判读：出现红色为阳性反应。如欲观察有无氮气产生，可于培养基管内加1只小倒管，有气泡产生，则表示有氮气生成。如欲检查培养基中硝酸盐是否被分解，可取锌粉少许加入培养基内，如出现红色表明硝酸盐仍存在;若不出现红色，表示硝酸盐已被分解。临床应用及意义：本试验广泛用于细菌鉴定。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐;假单胞菌属中有的细菌能产生氮气，如铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、斯氏假单胞菌，有的则能还原硝酸盐为亚硝酸盐，如鼻疽假单胞菌等;厌氧菌如韦荣菌也能还原硝酸盐为亚硝酸盐。
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